液相色譜反相系統梯度洗脱鬼峯解決方案

色譜學堂2018-12-02 15:08:43

同學們,乾貨又來了

大家在做液相色譜反相系統梯度洗脱時

有時會遇到儀器不進樣

也有出峯的情況

這種峯神出鬼沒,變幻莫測

像個幽靈一樣,所以被稱為鬼峯


也叫空白峯,系統峯等等

那麼遇到鬼峯該怎麼辦呢?

不要慌,聽我們慢慢講解


鬼峯的類型


判斷是不是鬼峯可以通過不進樣或進流動相只運行方法看基線中是否還存在莫名的色譜峯來判斷。


鬼峯分三種類型:

1.   空白出峯,但是保留時間和目標物相距較遠,對目標峯不會有干擾,通常情況下這種鬼峯我們不需要過多關注。


2.   空白出峯,出峯時間和目標物相近,可以作為保留時間的標誌物來幫助目標物定性,對目標物的定量結果不會產生影響,並且知道該鬼峯的產生來源,例如來自流動相配置或樣品過濾可能碰見的增塑劑等等。


3.   空白出峯,對目標物的定性定量有干擾,這種鬼峯就是我們接下來要主要解決的問題了。


鬼峯出現原因和解決辦法


通常情況下,如果出現鬼峯先排查進樣小瓶洗針瓶隔墊殘留


接下來就可以分成兩個大方面考慮:流動相液相系統。建議大家在碰見鬼峯時先考慮流動相的問題。


1流動相問題和解決辦法


針對流動相問題我們還可以再次一分為二的判斷,水相有機相


有機相

液相色譜的有機相建議使用色譜純的有機溶劑,而大多數有機相問題來自於你購買的有機相流動相可能混入了雜質

一般情況下這種問題出現在更換了新批次的有機相後出現所以希望大家的實驗室,有機相的購買、更換都能夠有記錄,做到有據可查


時也提醒各位同學,更換流動相批次之前,記得留下一些前一批次的流動相做對比。


水相

水相的問題來源於兩個方面:水本身水相中的添加物如緩衝劑、TFA等。


液相色譜的水相建議使用二級以上的純水,並且建議每天更換。如果沒有可以暫時使用娃哈哈純淨水等替代。

如果懷疑是水相導致的鬼峯問題,可以通過更換水相來判斷和解決。

如果懷疑是水中的添加物如緩衝劑導致鬼峯,可以更換另一批次的添加劑重新配置水相流動相來判斷和解決這個問題。


2液相系統問題和解決辦法


當流動相的問題被排除之後,我們通常考慮來自液相系統問題導致的鬼峯。來自液相系統問題導致的鬼峯的判斷和解決方法如下:

1

流動相溶劑瓶內的污染和溶劑瓶內流動相過濾頭的污染

判斷方式更換或清洗溶劑瓶看鬼峯問題能否被消除。

去除溶劑瓶內的過濾頭看鬼峯能否變小或消失,如果變小或消失則可以更換溶劑瓶內的過濾頭。


2

來自進樣器的樣品殘留

判斷方式:將進樣器的入口和出口管線更換成兩通,跳過進樣器直接連接,如果鬼峯問題解決,則高度懷疑進樣針,針座、六通閥轉子污染問題。

在懷疑這些問題之前也要先檢查六通閥的連接管線是否正常,管線接頭不匹配也會導致鬼峯哦!

如果是進樣針、針座六通閥轉子污染則要進行相關的清洗和更換

3

來自色譜柱的樣品殘留

判斷方式:將色譜柱更換成兩通或阻尼管,如果鬼峯消除則是色譜柱被污染。

接下來就要清洗色譜柱了,請戳這個鏈接瞭解色譜柱清洗和再生以及色譜柱保護問題。必要時需要更換新的色譜柱哦!

4

來自真空脱氣機故障

判斷方式:將溶劑入口管線人為引入一段氣泡,看脱氣機出口氣泡能否變小,如果沒有明顯變小則很可能是脱氣機故障,可以更換或維修真空脱氣機

5

泵的單向閥失靈或堵塞

判斷方式:此處可以通過泵壓力出口管線的流路是否正常來判斷和解決。

如果是單向閥堵塞或失靈,在儀器公司允許的情況下可以超聲清洗,超聲清洗效果不好需要考慮更換哦!

6

在線過濾器或保護柱有污染物殘留

可以通過更換在線過濾器和保護柱來判斷及解決該問題。

7

儀器管路污染殘留

液相系統各部件的連接管路以及內部流路眾多,儀器管路污染導致的鬼峯較難排查,只有通過排除前面所有的問題來判斷。

當確定是管路污染導致的鬼峯問題時需要清洗系統更換管路。比較直接的辦法是先移除流路中的色譜柱和流通池色譜柱用兩通替代,流通池入口管線直接連接到廢液瓶中。

清洗液相系統可以先用高比例水相移除緩衝鹽,再用有機相沖洗系統直至污染物被衝出。


好了,這麼多內容大家是不是覺得很繁雜?

本期主要是幫助大家瞭解解決鬼峯問題的思路,實際遇到鬼峯問題時,可能只需要在流動相上就可以找到原因和解決辦法。

今天的課程就到這裏了,大家記得關注色譜學堂公眾號,第一時間獲取更新!

 

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