測序樣品製備不知道這個和燒錢有什麼區別?

生物學霸2018-10-20 10:31:34

自第二代測序技術(NGS)一面世,便吸引了眾多目光。而如今,NGS 已經廣泛應用於多個領域,從基礎科學研究,到遺傳疾病、生殖健康及癌症研究等,這些都離不開二代測序技術。


並且為了獲得準確的測序結果,高質量的文庫至關重要。但測序文庫的製備,實則是一個繁瑣且耗時的過程,只要過程中稍有失誤,便會影響文庫質量,最終影響測序結果。


回想一下,你在進行過程中,是否也曾遇到這些情況:


加樣時,一個小走神,額,這個孔我加了還是沒加?


混勻試劑時,總是懷疑是否真的混勻了~


文庫製備的過程太長了,總是等啊等……


辛辛苦苦做完整個文庫製備流程,文庫質量卻差的沒法用,只好收拾河山,從頭再來~



而現在,為了讓 NGS 文庫製備更方便、更快速、更準確,賽默飛世爾科技基於領先的酶學技術及多年的酶學研究經驗,全新推出一系列 NGS 文庫製備新產品,幫助您提高 NGS 文庫製備成功率。


以全轉錄組 RNA-Seq 文庫構建為例,其文庫構建流程主要為:RNA 片段化、接頭雜交、接頭連接、反轉錄和 PCR 擴增引入 index。


△ Collibri™ Stranded RNA Library Prep Kit 建庫技術圖示


△ Collibri™ Stranded RNA Library Prep Kit 詳細實驗流程


多色示蹤染料有助於避免錯誤


藉助示蹤染料技術,可以實時糾正文庫製備中加樣及混合錯誤。在如下示例中,96 孔板中有一個孔沒有充分混勻或沒有加入相應的試劑。該孔呈現出不同的顏色,可及時發現並糾正失誤,之後才繼續進行文庫製備,以確保最高的文庫製備成功率。



△ 試劑未完全混勻


△ 試劑未添加


以下視頻詳解示蹤染料技術在 NGS 文庫構建過程中所帶來的好處:



新上市 Invitrogen NGS 文庫製備產品可用於以下應用:




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一:全轉錄組文庫製備

Invitrogen Collibri 鏈特異性

RNA 文庫製備試劑盒

(用於 Illumina 平台)




Invitrogen Collibri 鏈特異性 RNA 文庫製備試劑盒可在 6.5 小時之內快速製備去除 rRNA 的總 RNA-Seq 文庫(用於 Illumina 平台),可在 4.5 小時內快速製備用於 Illumina 平台的 mRNA-Seq 文庫,且鏈特異性 > 98%,甚至可從降解的樣品(如 FFPE 組織)中進行製備。


  • 方便快速—可在 6.5 h 內獲得全轉錄組鏈特異性文庫(含 rRNA 去除步驟)

  • 可提供 H/R/M rRNA 去除試劑盒—從 100~1,000 ng 人、小鼠或大鼠總 RNA 中高效去除 rRNA

  • 顏色視覺提示—可提示是否加入了試劑,或者試劑是否完全混勻


點擊查看大圖




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二:文庫定量

Invitrogen Collibri 文庫定量試劑盒



基於 qPCR 的 Invitrogen Collibri 文庫定量試劑盒可用於大批量樣品的定量,是對文庫有效濃度進行準確定量的理想方法。


  • 準確定量文庫 — 可以定量從各種樣品類型(包括降解的樣品)製備的文庫

  • 易於使用 — 所有組分均為即用型,無需製備試劑

  • 顏色視覺提示 — 降低反應配製期間移液錯誤的風險

  • Platinum 熱啟動技術 — 提供卓越的特異性、靈敏度,便於室温下配製反應體系




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三:文庫擴增

Invitrogen Platinum SuperFi

文庫擴增



Invitrogen Platinum SuperFi 文庫擴增預混液是一種即用型溶液,專為 NGS 文庫擴增而設計。預混液包括 Invitrogen Platinum SuperFi DNA 聚合酶以及含有所有必需成分的專用反應緩衝液,以獲得均一的轉錄覆蓋度。


  • 高保真度—將錯誤率降至最低

  • 均一擴增—偏好較小(不受 GC 含量影響)

  • 預混液—即用型形式增強易用性

  • 顏色視覺提示—有助於降低反應配製期間移液錯誤的風險




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題圖來源:shutterstock 正版圖庫

文章來源:賽默飛

圖片來源:賽默飛

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