Nat Biotech | 在酵母中使用CRISPR/Cas9實現DNA序列變體文庫的高通量創建和功能分析

生物極客2018-05-27 00:35:44

責編丨小 程


2018年5月21日,哈佛大學的Alejandro Chavez組和George M Church組在Nature Biotechnology上在線發表了題為High-throughput creation and functional profiling of DNA sequence variant libraries” 的文章。文章報道了在酵母中使用CRISPR/Cas9實現DNA序列變體文庫的高通量創建和功能分析的方法



對於理解基因組功能,大型遺傳變異文庫的構建和表徵至關重要,但仍然具有挑戰性。文章介紹了一種基於Cas9的方法,用於在酵母中產生具有特定基因改變(缺失、替換、插入)的突變體庫,效率為80-100%,以及跟蹤其整體健康狀況的方法。


該研究對DNA解旋酶SGS1的小而遍佈全蛋白序列的缺失突變體和針對高度保守殘基的一系列點突變實施表徵,證明了前述方法的實用性。此外,研究者還創建了一個全基因組文庫,針對分佈在整個酵母基因組中的315個性能不佳的小開放閲讀框,評估了哪些小開放閲讀框對於在各種環境條件下生長至關重要。此策略允許以高通量的方式精確地研究基礎生物學問題。




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TAGS:突變體基因組文章文庫